Les levures ⇒ congélation des levures

[Penn-Maen]

je ré-uppe un peu ce topic, car au cours de mes pérégrination je viens de croiser deux / trois choses qui m'interpellent :

• ici, on dit que la concentration optimal en glycerol serait de 10 à 15%. Au delà, il y aurait une perte de viabilité. J'ai toujours entendu dire 25% ...
• Dans le même sujet, et aussi ici, ils conseillent de décongeler le tube le plus rapidement possible dans le l'eau à ~37°C Là encore, il me semblait que les bonnes pratiques imposaient un dégel "le plus lent possible", idéalement sur pain de glace au réfrigérateur.
• Toujours dans ces mêmes sujets, ils ne semblent pas faire de refroidissement à 4/5°C avant congélation (tube directement au congèl). Bonne ou mauvaise pratique ?

La bonne idée que je relève est de stocker les tubes dans une boite contenant une solution ingélive (saumure, vodka) à hauteur du remplissage des tubes.

PM, en quête

[psykomaz]

Mais du coup quand on refait un starter a base de levure congelé on balance la glycero avec ? Ca fait rien au mout ?

[cedric199]

non,c'est un additif alimentaire e422 utilisé aussi dans les médicaments, le liquide de cigarette electronique ...

[Penn-Maen]

la glycérine est métabolisée par les levures. (et la quantité est tellement faible VS le volume de l'ensemble que ça ne doit pas jouer)

edit : grilled

[kenypixel]

je ré-uppe un peu ce topic, car au cours de mes pérégrination je viens de croiser deux / trois choses qui m'interpellent :

• ici, on dit que la concentration optimal en glycerol serait de 10 à 15%. Au delà, il y aurait une perte de viabilité. J'ai toujours entendu dire 25% ...
• Dans le même sujet, et aussi ici, ils conseillent de décongeler le tube le plus rapidement possible dans le l'eau à ~37°C Là encore, il me semblait que les bonnes pratiques imposaient un dégel "le plus lent possible", idéalement sur pain de glace au réfrigérateur.
• Toujours dans ces mêmes sujets, ils ne semblent pas faire de refroidissement à 4/5°C avant congélation (tube directement au congèl). Bonne ou mauvaise pratique ?

La bonne idée que je relève est de stocker les tubes dans une boite contenant une solution ingélive (saumure, vodka) à hauteur du remplissage des tubes.

PM, en quête

Je ne suis pas un expert mais je congèle mes souches de levures.
La différence c'est que je ne décongèle pas un tube complet, je fais repartir quelques cellules grattées sur du pétri.
Christophe pourra me corriger si je dis des bêtises, mais pour éviter ça je vais essayer de ne pas trop en dire..

1 - La concentration de glycérol est apparemment liée à la température de stockage. Certains tubes sont à 50% de glycérols mais ils sont stockés à -180°c... Une concentration de 10 à 15% est la norme pour un stockage de congélateur à -20°c.
2 - Après la lecture de Yeast : The pratical guide to beer fermentation, je rejoins totalement ton avis. Il est déconseillé d'avoir un choc thermique violent.
3 - Pour la congélation des tubes, moi aussi je me suis posé la question. Le problème d'un passage au frigo c'est la sédimentation des levures dans le fond du tube. Maintenant je passe directement mes tubes au congélateur. Est-ce que c'est bien ? Je ne sais pas trop.. Christophe aide nous

[Nezahualcoyotl]

je ré-uppe un peu ce topic, car au cours de mes pérégrination je viens de croiser deux / trois choses qui m'interpellent :

• ici, on dit que la concentration optimal en glycerol serait de 10 à 15%. Au delà, il y aurait une perte de viabilité. J'ai toujours entendu dire 25% ...
• Dans le même sujet, et aussi ici, ils conseillent de décongeler le tube le plus rapidement possible dans le l'eau à ~37°C Là encore, il me semblait que les bonnes pratiques imposaient un dégel "le plus lent possible", idéalement sur pain de glace au réfrigérateur.
• Toujours dans ces mêmes sujets, ils ne semblent pas faire de refroidissement à 4/5°C avant congélation (tube directement au congèl). Bonne ou mauvaise pratique ?

La bonne idée que je relève est de stocker les tubes dans une boite contenant une solution ingélive (saumure, vodka) à hauteur du remplissage des tubes.

PM, en quête

Salut Penn-Maen,

Je crois que nous en avions déjà parlé sur le forum. Mais je prends quelques minutes pour revenir sur le sujet.

En premier lieu, cette pratique décrite là est très éloignée de celle de nos laboratoires, donc je ne me prononcerais pas sur l'exactitude des chiffres annoncés.

Quand je congèle mes souches , je les congèle dans une solution de 25% glycérol ( 20 30%) pour une température de - 80°C minimum, congélation rapide ( à l'inverse de la congélation de mes cellules eucaryotes animales en congélation lente, -1°c /s jusqu'à -80°C ) . Pour la récupération des levures , je ne décongèle jamais le tube, mais gratte sa surface avec un anse de platine stérile qui me permet d'ensemencer 2 à 3 ml de milieu.

Il ne s'agit donc pas de congeler des milliards de cellules en vue de les réutiliser pour un starter ou un brassin! Je ne pense pas que cela soit la meilleure méthode. Mais mon problème est autre.

Ta dernière remarque , "stocker les tubes .... dans une solution de saumure ou Vodka " ne m'apparait pas bonne non plus , elle ne garantit pas la stérilité de la conservation.

Pour le glycérol/ glycérine pas de problème pour la culture. NB: les levures ne le métabolisent pas mais en produisent .

Nezahualcoyotl, rapidement

[psykomaz]

Donc du coup tu grattes ce que tu as congelé dans 2/3ml de "milieu"'donc on peut faire ca dans du mout ?
Et apres on ensemence un autre mileu plus gros et on peut lancer son starter ?

[Nezahualcoyotl]

Donc du coup tu grattes ce que tu as congelé dans 2/3ml de "milieu"'donc on peut faire ca dans du mout ?
Et apres on ensemence un autre mileu plus gros et on peut lancer son starter ?

Oui! avec un mout peu sucré alors : 20g de glucose par litre soit . Après tu peux passer sur du mout avec une densité de 1.040.

Nezahualcoyotl

[psykomaz]

Super j essayerais un jour, apres le coté totalement sterile me fais peur, faut travailler dans des conditions irréprochable.

[Penn-Maen]

@Nezahualcoyotl :
- oui, mais certains trucs se perdent Je repousse sans cesse le moment de passer en liquide, ceci expliquant peut-être cela
- Donc dans ton process, tu ne dégèles pas. Ok. Pas de risque pour les cellules ?
- le taux de glycérol : ok itou
- pour la "métabolisation" : merde, j'étais persuadé du truc. Bon, bah y'a plus qu'a mettre en application ma signature

Pour le bain de saumure ou de vodka : ce n'est pas pour garantir la stérilité, mais pour assurer une masse thermique importante dans le cas d'un congèl à dégivrage automatique. D'ailleurs, les tubes ne sont pas immergés : le niveau de liquide doit être, d'après l'auteur, à peu prêt identique à celui de remplissage des tubes (les bouchons restent donc "secs".