Préparation de 4 tubes remplis de 9ml d'eau distillée (le quatrième est optionnel et son utilisation dépendra de la concentration initiale) et 1 tube préparé avec 1ml de bleu de méthylène pour la viabilité.
On préleve 1ml de notre mélange initial (levure en solution isotonique dont la proportion est a conserver pour l'inoculation) que l'on met dans le premier tube, on mélange, puis dans le second et ainsi de suite.
Pour la dernière, on rempli dans le tube avec le bleu de méthylène, mélange et attente 1 minute avant l'ajout de 8ml d'eau distillée.
Et là quelqu'un sonne à la porte, c'était le recensement (véridique), vous êtes combien dans le foyer? heu, 4… Milliards?
Les cellules colorées sont les cellules mortes et là il y a vraiment de la casse! Pour celle-là, je n'ai pas compté car a ce niveau de viabilité il faut refaire un starter.
Sinon, voici comment je procède:
- Je choisis et compte le nombre de cellules (mortes et vivantes) entre 10 et 25 carrés (la cellule en fait 100) voici un lien sur un protocole.
- Je choisis idéalement les carrés dont le nombre de cellules est compris entre 5 et 10 (et je reste sur la même taille de carrés ou rectangles).
- Je compte les mortes et les vivantes que je rapporte à 100 (comme si j'avais compté l'ensemble de la cellule).
- A ce stade, je calcule mon pourcentage de viabilité.
- L'ensemble de la cellule correspondant à 1mm3 ou 10e-6 Litre, en appliquant ma dilution, j'ai mon nombre de cellule (vivantes) pour ce volume.
- Je rapporte ce volume a mon échelle, celle du ml. Et je calcule mon taux d'inoculation.
Si je compte sur 25 carrés (ce sont des grands que l'on parle): 207 cellules vivantes et 4 cellules colorées.
-Ce qui fait dont environ 98% de viabilité.
-207*4 = 828 cellules de moyenne pour l'ensemble du quadrillage donc pour 10e-6 Litre.
-La dilution étant de 10e4 donne donc 828*10e4 = 8,28 * 10e6 cellules de levure pour 10e-6 Litre.
-Pour la conversion des mm3 (10e-6 Litre) en ml on multiplie par 10e3. Donc 8,28 * 10e9 pour 1 ml.
Ensuite mon calculateur préféré me demande 200 Millards de cellules pour ensemencer mon brassin. Donc 2*10e11 / 8,28*10e9 = 24,15 ml.