Les levures ⇒ congélation des levures

[Nezahualcoyotl]

Pour le bain de saumure ou de vodka : ce n'est pas pour garantir la stérilité, mais pour assurer une masse thermique importante dans le cas d'un congèl à dégivrage automatique. D'ailleurs, les tubes ne sont pas immergés : le niveau de liquide doit être, d'après l'auteur, à peu prêt identique à celui de remplissage des tubes (les bouchons restent donc "secs".

Autant pour moi qui avais lu trop vite!

Pas de danger de décongeler ainsi les souches... Les souches congelées n'aiment surtout pas les cycles de congélation/décongélation!

Nezahualcoyotl

[Penn-Maen]

ce WE, il s'est posé une question et j'ai été collé. Qui de mon interlocuteur ou de votre serviteur était dans le tort, je ne sais. Dont acte, je fais appel au forum.

Imaginons un individu qui conserve ses souches au congélateur.
A chaque fois qu'il achète une nouvelle souche, il fait un starter et prélève l'équivalent de 5 micro-tubes qu'il va congeler.
Il réutilise 3 tubes plus tard, et se sert du 4ème pour refaire 4 tubes. Le 5ème, c'est la sécurité.

D'après cette personne, son 4ème tube est l'équivalent d'un master. Il prétend qu'avant il faisait "un gratouilli" sur la surface d'un tube, puis micro-culture avant de passer sur gélose et reconstitution du stock. Le tube "grattouillé" servait à faire un starter, donc il ne conservait jamais vraiment la souche (pas de tube de secours comme maintenant).
Avec sa "nouvelle méthode", il ne trouve pas de différence significative entre les 2 techniques, et prétend ne pas détecter de perte de caractéristiques. Sur au moins 3 souches, il serait à plus de 25 recultures.

D'après moi, la technique sur gélose permet de garder plus facilement les caractéristiques de la souche, alors que des cultures successives font dériver.

[bazoo]

Je suis d'accord avec toi.
En milieux liquide, tu prends ce que tu choppes donc des levures mutantes et de normale.
En milieux solide, tube ou gelose en boite de pétri, tu peux éliminer les colonies qui ont mutées et si tu as une infection, tu peux le voir sur milieux solide

[Nezahualcoyotl]

Oui et...non!

Pour qu'il y est dérive , PM , il faut qu'il y ait sélection, sélection qui peut aussi bien se faire en milieu liquide ( par exemple sur le caractère flocculant d'une souche avec des décantations plus ou moins bien faites - c'est pourquoi j'ai choisi l'option centrifugation -) qu'en milieu gélosé si au repiquage , tu ne contrôles pas la conformité de ta souche avec ta souche mère.

Personnellement, je congéle des souches de depuis 2000-2001 ( je ne sais plus exactement ), 3 tubes d'environ 1 ml, mais, en gratouillant comme tu dis je n'ai pas épuisé un tube de mon trio.

Nezahualcoyotl

[Penn-Maen]

Le gars en question, que je croisais pour la première fois, disait qu'il ne gratouillait qu'une fois, et que le tube gratouillé partait faire un starter pour éviter une "evntuelle" contamination.

Donc, si je suis bien, ceux qui procède par culture successive ou repiquage, sur gélose ou par récupération d'une partie du starter, provoquent une dérive ? Car je suppose que les substrats sont rarement réalisés avec un proto-moût correspondant exactement aux bières qui seront ensemencées

Dis, Neza, 1 ml, ça doit dégeler rapidement. Tu fais comment pour tes manips ? Ça doit pas être facile de casser un bec bunsen dans le congélo (blague à part, c'est la question d'un mec qui n'y connait rien, mais qui est très curieux )

Question bonux : le brassam n'a pas de moyen pour vérifier la conformité entre souche repiquée et souche-mère, si ? (hormis faire un brassin et le splitter)

[bazoo]

Pour moi, il y a une différence visuelle sur les colonies sur gelose entre les levures mutantes et celles qui ont pas muté. Je suis dans l'erreur?

[Nezahualcoyotl]

Pour moi, il y a une différence visuelle sur les colonies sur gelose entre les levures mutantes et celles qui ont pas muté. Je suis dans l'erreur?

Bazoo , là tu évoques la mutation "petit colonnie" qui voit apparaitre sur la gélose des colonnies plus petites ( ceci étant dû à une mutation de gènes impliqués dans la chaîne respiratoire ) , mais ce n'est pas le seul cas de mutation qui peut intervenir et là sans que cela soit notable sur gélose.

Nezauhalcoyotl

[bazoo]

Merci, c'était justement à cette mutation que je pensais et je pensais, avec tort que c'était le cas pour toutes

[Nezahualcoyotl]

Le gars en question, que je croisais pour la première fois, disait qu'il ne gratouillait qu'une fois, et que le tube gratouillé partait faire un starter pour éviter une "evntuelle" contamination.

Donc, si je suis bien, ceux qui procède par culture successive ou repiquage, sur gélose ou par récupération d'une partie du starter, provoquent une dérive ? Car je suppose que les substrats sont rarement réalisés avec un proto-moût correspondant exactement aux bières qui seront ensemencées

Dis, Neza, 1 ml, ça doit dégeler rapidement. Tu fais comment pour tes manips ? Ça doit pas être facile de casser un bec bunsen dans le congélo (blague à part, c'est la question d'un mec qui n'y connait rien, mais qui est très curieux )

Question bonux : le brassam n'a pas de moyen pour vérifier la conformité entre souche repiquée et souche-mère, si ? (hormis faire un brassin et le splitter)

C'est un peu gâché cette façon qu'il a de procéder ton gars....

Le tube est conservé sur de la glace pilée, donc aucun soucis en 30 secondes il retourne à -80C.

Non, effectivement pas facile, même pour moi, il faut des outils d'analyse biochimique ou de biologie moléculaire.

Nezahualcoyotl

[Penn-Maen]

C'est un peu gâché cette façon qu'il a de procéder ton gars....

Après, entre ce qu'il m'a dit et ce qu'il fait, il y a peut-être une grande marge. Il paraissait droit dans ses bottes, mais bon, c'est l'ami d'un ami d'un ami, alors... Ses techniques et propos m'intriguaient, or je n'aime pas rester sur un doute.

Pour ta technique, faut faire confiance à l'outil d'analyse biochimique de compète qui se trouve entre nos maxillaires

PS : ok pour ta technique, faut avoir le coup de main certainement.