Les levures ⇒ congélation des levures

[leurne]

Je travaille jamais salement!!
Ok ok... Bon, ca va être difficile de faire bouillir à 120°C si je mets pas dans une cocotte (et pour quelques litres...) du coup je vais faire 20/30 min à ébu.
Je mettrais dans une bouteille que je mets au four avec un peu d'eau 20 min à 150°C

Neza, tu utilises quoi comme milieu? Des milieux préparés de labo?

[Lapin fou]

Ok ok... Bon, ca va être difficile de faire bouillir à 120°C si je mets pas dans une cocotte (et pour quelques litres...) du coup je vais faire 20/30 min à ébu.

Je te conseille de mettre ta solution ds des récipents légèrement fermés (pas serré à fond) + petit bout de papier alu sur le capuchon, 30 min à la cocote (après début de rotation de la soupape) et c'est parti...

C'est le seul moyen de la stériliser, et 30 min d'ébu à 100 ne le remplacera pas...

Voilà celà dit je me suis fait ma banque de levure congelé ds le glycerol avec les infos trouvé sur le forum (beaucoup de Nezahualcoyotl ), et ça marche en effet tip top (mme ds un congélo normal à -20) !

[leurne]

Mais à ce moment là, une fois que tu en as besoin, tu fais comment? Tu preleve dans le tube (ou tu le prends en entier) et tu en fais un starter?

Le truc c'est que le glycerol, je sais pas trop ou je peux en acheter... (je suis meme pas sûr que l'on peut en acheter... Un prof en parler il y a pas longtemps, concernant le fait que la glycérine peut aussi produire de la nitroglycerine ou un truc du genre... Enfin je dormais un peu ce jour là)

L'interet avec l'eau stérile ou la tryptone sel etant que c'est très simple d'en avoir. ou du moins, je pense que l'école sera plus apte à m'en donner

EDIT : et le milieu de culture tu utilises quoi?!:!!

[Lapin fou]

Mais à ce moment là, une fois que tu en as besoin, tu fais comment? Tu preleve dans le tube (ou tu le prends en entier) et tu en fais un starter?

Ca depend de ce que tu veux en faire, soit si tu veux en faire des petits, tu prélève une goute et tu fais une culture sur gelose (et après tu fais ton starter en plusieurs étapes à partir d'une des colonies), soit en effet tu peux balancer ton tube décongelé (lentement, sur de la glace) dans un starter (ça marche très bien)...

Le glycerol ce trouve assez facilement, ça sonne en effet un peu "nitroglycerine", mais c'est aussi tout simplement un antigel...

(Après je sais pas trop comment ça se passe pour ça en France, essaye peut être dans une grosse pharmacie, un fournisseur de matériel pour labo, qq chose dans le genre...)

[leurne]

a wui, mon ami google a l'air de dire la meme chose, facile à trouver. Bon ben on va voir ca

[Cede]

De la glycérine alimentaire il me semble, je ne sais plus, j'en ai acheté en pharmacie.
Diluée à 30%, puis stérilisée et ensuite moitié moitié avec les levures dans un tube puis au frigo, puis au congélo.

Ensuite congélo, frigo, starter

Mais je crois que quelqu'un a joué avec ma banque de levures dans le congélo..... ;(

[leurne]

wep, pis apparemment, pour les economies :

prélever un peu de ce mélange glycerine/levure => mout stérile dans tube pour relancer et ensuite starter
ca évite d'en avoir trop.

Et de temps en temps :
mout stérile + agar agar => boite de pétris => vérif' si tout est bon

Bon, c'est décidé, je me garderais la moitié du tube de la california en tube avec de la glycerine

[Nezahualcoyotl]

Alors , je sais qu'il me manque du temps pour éclaicir tout cela, mais par ailleurs ce fut déjà dit et écrit , par d'autres aussi sur le forum .

Voici ce que je conseille ( mais d'autres méthode fonctionnent aussi , peut être un peu moins optimum ):

Pour congeler:
* inutile de congeler des litres et des litres, quelques ml ( millilitre ) suffisent, des microtubes se trouvent maintenant facilement ...
* attention , adapter votre taux de glycérol à votre température de congélation: inutile de congeler à plus de 15% si vous ne descendez pas à - de 20°C , dans le cas contraire, eg, une congélation à -18°c ( comme c'est généralement le cas dans nos congélateur domestique ) entraîne une sédimentation des levures au fond du tube, le milieu ne demeure visqueux ,non figé...

Pour la décongélation:
* gratter la surface du milieu glycérolé avec une pointe stérile ( le tube étant ramené à une température la plus proche de 0°c ), disperser l'échantillon dans un peu de moût stérile ( toujours quelques ml ) et étaler sur une gélose en boîte de Pétri ( en effet , les cellules reprendront bien mieux avec un apport d’oxygène optimum ) , autre avantage la boîte de gélose dans de bonne condition conserve bien mieux les levures d'un milieu liquide ( mon record: le réveil de cellules après 18 mois de gélose )

Amplification:
* reprendre une colonie isolée , bien identifiée, apparue après 48 à 72h à 20°C, dans un volume de 50 à 100ml de moût stérile.

Et la suite vous la connaissez...

J'ai conscience que tous ces protocoles nécessiteraient d'être compilés. Attention d'autres variantes fonctionnent aussi , mais peut-être, à mon goût plus sujettes à des aléas .

J'ai toujours le désir d'organiser pour les parisiens ( ou ceux qui le désiraient) des séances d'initiation, mais le temps , la nouvelle maison et trois diablotins, ...la vie quoi!

Nezahualcoyotl, qui s'en retourne à ces cellules

[leurne]

* attention , adapter votre taux de glycérol à votre température de congélation: inutile de congeler à plus de 15% si vous ne descendez pas à - de 20°C , dans le cas contraire, eg, une congélation à -18°c ( comme c'est généralement le cas dans nos congélateur domestique ) entraîne une sédimentation des levures au fond du tube, le milieu ne demeure visqueux ,non figé...

pas compris.... inutile de congeler à plus de 15% de? glycérol? Mais si on mets plus de glycérol, c'est plus visqueux, donc ca sédimente moins?

* gratter la surface du milieu glycérolé avec une pointe stérile ( le tube étant ramené à une température la plus proche de 0°c ), disperser l'échantillon dans un peu de moût stérile ( toujours quelques ml ) et étaler sur une gélose en boîte de Pétri ( en effet , les cellules reprendront bien mieux avec un apport d’oxygène optimum ) , autre avantage la boîte de gélose dans de bonne condition conserve bien mieux les levures d'un milieu liquide ( mon record: le réveil de cellules après 18 mois de gélose )

juste gratter la surface et on mets ca sur une gélose et ca roule?! c'est cool ça!

* reprendre une colonie isolée , bien identifiée, apparue après 48 à 72h à 20°C, dans un volume de 50 à 100ml de moût stérile.

tu aurais une photo des colonies de levure isolé?

mici

[Nezahualcoyotl]

pas compris.... inutile de congeler à plus de 15% de? glycérol? Mais si on mets plus de glycérol, c'est plus visqueux, donc ca sédimente moins?

Si la température n'est pas suffisamment basse, le milieu glicérolé demeure liquide , même si visqueux et les cellules sédimentent à la longue au fond du tube . Le glycérol est ajouté afin de protéger les cellules. Et non pour conserver le milieu liquide.

juste gratter la surface et on mets ca sur une gélose et ca roule?! c'est cool ça!

Normalement , le nombre de cellules est suffisant pour le permettre oui

tu aurais une photo des colonies de levure isolé?

mici

Déjà posté sur le site ... je rechercherai.

Nezahualcoyotl, entre cellules et couches-culottes