Infections ⇒ Infection à Bacillus

[St Pavin]

Bien le bonjour les amis !
Je souhaitais vous faire partager une expérience récente avec quelques levures que j'avais récupéré sur un brassin en février. La levure était une Wy ... genre Am IPA pour ne pas la citer ; je l'ai récupéré dans le Slurry de fond de cuve, de manière la plus stérile possible. J'ai pris environ 20 ml que j'ai mélangé avec 10ml d'eau + 20 ml de glycérine pharmaceutique que j'ai fait bouillir 2 min. Mise en flacon stérile médical puis direction le congélateur jusqu'à il y a quelques jours ...
Décongélation lente sur 24h puis 2 petits starters histoire de réveiller les bêtes ... Quelques signes de multiplication et là j'ai décidé de vérifier l'absence d'organisme indésirable !
Un peu de slurry, un copain bactériologiste et voilà !!



Pour les explications : Les gros amas Gram + et – correspondent aux levures de Saccharomyces. Normalement les levures sont plus Gram + mais elles se décolorent assez facilement d’où l’aspect Gram +/- ; presque au milieu apparaît un tout petit bâtonnet Gram + : le Bacillus
Bon la contamination n'a pas l'air majeure, et les Bacillus (en tout cas le Lacto), n'aime pas trop le houblon ... Je vais faire multiplier tout ça et voir sur un mini brassin si ça tourne vinaigre ou pas ...

[bazoo]

Je crois me rappeler de mes cours de quand j'étais plus djeun que le bacillus, c'est comme les morbacs facile à chopper , dur à virer

[Nezahualcoyotl]

Bonjour St Pavin

Quelques remarques après ma lecture:
votre taux de glycérine est trop élevé pour la congélation de culture; 15,5% à 25% est généralement utilisé pour des températures inférieures à -20°C;
il n'est pas bon de laisser réchauffer votre tube congelé: la surface du milieu congelé est grattée, mise en culture, directement; cela permet de conserver bien mieux votre culture que des cycles congélation/décongélation;
avez vous fait une coloration au bleu de méthylène afin de connaitre la viabilité de votre population ( plutôt qu'un Gram, peu instructif dans notre cas ) ?

La contamination peut être éliminée facilement par une culture en milieu solide ( YPD ou mout plus agar ) en présence de chloramphenicol 50µg/ml ( que votre ami microbiologiste devrait avoir ), faire pousser à basse température ( <30°C ). Mais le mieux est de partir de culture saine.

Nezahualcoyotl

[Nezahualcoyotl]

Au fait, tes levures n'ont pas l'air au mieux de leur forme....

Nezahualcoyotl

[St Pavin]

Ah l'avis eclairé du Coyote ! J'espérais qu'un tel sujet l'intéresserait.
Cet échantillon provient de mes premiers essais de congélation, donc pas mal de tâtonnements ...
J'ai directement remis l'échantillon en starter après 24h à 4"C et j'ai eu quelques signes de multiplication. Mais ne voulant pas prendre de risque, j'ai fait coloré le fond de l'échantillon initial. Le but était seulement de vérifier rapidement l'absence de bactéries (renseignements pris , ils font exceptionnellement des colorations au bleu, déjà le gram à la main, c'est pas tous les jours (automatisation quand tu nous tiens...)).
Si j'ai bien compris ta 2ieme phrase, on laisse le tube au congelo, faut juste récupérer un peu de matière congelée et la mettre en culture sur une boite ?
Pour la culture, je vais essayer de voir ce que je peux récupérer en terme de milieu. Trop dangereux de faire fructifier celle-là ??

[Nezahualcoyotl]

Effectivement, le tube renfermant les levures congelées, n'est pas décongelé. Tu grattes sa surface à l'aide d'un instrument stérile ( anse de platine, ou même cure-dent en bois autoclavé dans un bocal à confiture ) et tu plonges cela dans le milieu de culture ( idéalement tube de 15ml avec 3ml de milieu) tu mets à 30°C en agitation.

Je ne pense pas que ta culture présente un danger quelconque.

Nezahualcoyotl

[St Pavin]

Le plus simple pour moi va être un bistouri passé à la flamme !
Pour le milieu, j'imagine que tu parles de mout stérile (genre Extrait sec + eau + nutriments genre Wyeast préparé à l'avance), non ?? Par contre la microculture je ne sais pas encore comment trop procéder ...
En attendant, je vais remettre le Bacillus et les levures en multiplication, je viens d'acquérir un peu de verrerie supplémentaire dans une boite très bien juste à coté de chez moi ! Je vais peut-être obtenir un mélange de compétition ?

[Nezahualcoyotl]

Le plus simple pour moi va être un bistouri passé à la flamme !

Je crains, ne connaissant pas tes tubes, que ta lame de bistouri ne soit trop large.... Achète toi plusieurs centaines de crue-dents en bois, stérilise-les par autoclavage et utilise-les .

Nezahualcoyotl

[St Pavin]

Non aucun souci, ce sont de bon gros pots de bactério (cf infra)
ça me dit pas quel milieu tu utilises pour ta "décongélation"

[Nezahualcoyotl]

ça me dit pas quel milieu tu utilises pour ta "décongélation"

Je n'ai pas autant de place que toi, alors j'utilise des tubes de 2ml ( cryotube ) . Pour le milieu, je prépare une solution YPD ( yeast extract 10g / Peptone 20g / Dextrose ( glucose ) 20g , pH 6 et 30% glycérol ) stérile. Je mélange volume à volume avec un culture fraiche et directement à -80°C ( avant l'azote liquide quand c'est possible ).

Nezahualcoyot, tout est dit!