Les levures ⇒ photo de levures au microscope

[dany06hd]

j'ai fait cette photo avec un microscope "cheap" est-ce que ça semble correct ?
les levures sont en cours de réhydratation, le grossissement est de 40X (j'investirai plus tard dans un bino 400X à 400 boules...).

[jl972]

Bonjour Dany06hd,

Sympa de nous montrer ta première photo ! Je vois que ça avance !
Cependant, amha, l'intérêt du microscope est de déterminer si l'on est en présence de levures "vivantes", saines ; il faut donc utiliser un colorant pour pouvoir faire cette sélection.
Ces procédures semblent avoir déjà été évoquées précédemment dans le forum.
On attend donc les nouvelles photos !
Bon courage,
bien cordialement

jean-louis

[dany06hd]

en effet j'ai fait cette photo dans la hâte... j'essayerai d'approfondir avec le temps.

[Oliv]

Attention une bino ça sert pas à la même chose. Une bino tu éclaires par dessus, et pas par dessous, tu n'auras donc pas d'image comme celle-ci.
Sur ta photo plusieurs remarques :
La mise au point n'est pas terrible
Il y a une importante aberration chromatique par l'objectif (décomposition de la lumière blanche qui fait un effet d'arc en ciel autour de tes bébêtes plus réfringentes que ton milieu)
Ton inoculat est trop dense et tes bestioles se chevauchent de manière indécente
Sans système de contraste on ne sait pas dire si elles sont effectivement turgescentes, et donc vivantes, ou pas. Il te faut donc colorer. Pour info, le bleu de méthylène se trouve dans les cartouches d'encre Waterman (ou les plus courantes)

[Oliv]

Je mets ici un échange que j'ai eu avec particules qui peut intéresser tout le monde.

Salut Olivier,

Une petite question pour toi.

J’ai pu me procurer du bleu de méthylène chez mon pharmacien (en Belgique uniquement avec ordonnance médicale), mais il est en poudre, dans quoi je doit le diluer ?

A+
Roland

Dans l'eau. solution stock à 0.2% soit 2g dans 1L d'eau déminéralisée.
une goutte sur ta lame en plus des levures.

[Nezahualcoyotl]

Dans l'eau. solution stock à 0.2% soit 2g dans 1L d'eau déminéralisée.
une goutte sur ta lame en plus des levures.

Bonjour Olivier,

Le mieux ( qui est souvent l'ennemi du bien , je te l'accorde ) ne serait il pas de le diluer dans une solution isotonique ( sérum physiologique , 0.9% NaCl , tamponnée au pH physiologie - en vente aussi en pharmacie et même grande surface rayon puériculture n'est ce pas Olivier - de nos hôtes ) .

En tout cas , c'est ainsi que je procède pour mes solutions ( méthylène, Trypan , Rouge Pouceau , Coomassie et autres colorants vitales .

Christophe , de garde

[Nezahualcoyotl]

Pour la photographie en elle même , je dirais ,comme Olivier, "Peux mieux faire". Mais là tu es peut-être ( sans doute !! ) limité par ton microscope .

Christophe, de garde

[Oliv]

Trypan [...] et autres colorants vitales .

Christophe , de garde

Trypan vital ??? Outre l'orthographe approximative (colorants vitaux en français) le bleu Trypan et un marqueur de mortalité, et donc pas de vitalité ...

Oliv veille

[jl972]

Bonjour Christophe expert,

Le laboratoire de microbiologie d'une école bien connue des brasseurs (Nord-Est) préconise une solution de
0,01 g de bleu de méthylène dans 10 ml d'eau distillée ; à cette solution il ajoute 2 g de citrate de sodium.
Le mélange ainsi réalisé est complété 100 ml avec de l'eau distillée puis filtré sur membrane filtrante.

Questions :
- utilité du citrate de sodium ?
- un filtre papier peut-il remplacer la "membrane filtrante" ?
- si non, inconvénients de l'absence de filtration ?

Merci pour ton éclairage,
Bien cordialement,
jean-louis

[Nezahualcoyotl]

Bonjour Christophe expert,

Le laboratoire de microbiologie d'une école bien connue des brasseurs (Nord-Est) préconise une solution de
0,01 g de bleu de méthylène dans 10 ml d'eau distillée ; à cette solution il ajoute 2 g de citrate de sodium.
Le mélange ainsi réalisé est complété 100 ml avec de l'eau distillée puis filtré sur membrane filtrante.

Questions :
- utilité du citrate de sodium ?
- un filtre papier peut-il remplacer la "membrane filtrante" ?
- si non, inconvénients de l'absence de filtration ?

Merci pour ton éclairage,
Bien cordialement,
jean-louis

La nuit fut dure , Olivier. Tu as raison! Mais le B Trypan colorant les cellules mortes , par déduction , tu comptabilises les vivantes .
Le citrate de sodium ( mono, di ou trisodique? ) est un tampon pH , mais là il manque un paramètre , le pH !! de mémoire ( mais Olivier vérifie STP ) je pencherais pour du disodique pKa au environ de 5,5.
La filtration sur papier ou membrane filtrant(e) évite de se retrouver avec des agrégats mal dissouts en solution.

Christophe, de garde