Les levuressynthèse du bouquin de rajotte sur la culture des levures

Saccharomyces chéries... cerevisiae, carsbergensis, bruxellensis, ...
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Jodet
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Re: synthèse du bouquin de rajotte sur la culture des levures

Message par Jodet »

Bonsoir à tous,
belix a écrit :Pour la stérilisation il faut donc une vapeur a 120 degres qui nécessite une pression de 2 bars qui est obtenue avec un autoclave. Le problème c'est qu'un auto-cuiseur classique ne monte pas a deux bars et que le prix d'un autoclave est exorbitant,
C'est effectivement une des raisons que m'avait évoqué André MICLO à Saint-Nicolas et que j'ai oublié de vous retranscrire dans mon post précédent. L'avantage de la double stérilisation (2x30 minutes à 24h d'intervalle) permet d'utiliser un autocuiseur à la place d'un autoclave et que c'est largement suffisant m'a-t-il dit ! :wink:
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dany06hd
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Re: synthèse du bouquin de rajotte sur la culture des levures

Message par dany06hd »

je vais essayer de répondre à tout et à tous:

bélix ta solution d'agar agar devra être à la température minimum à laquelle elle reste liquide.
45°C c'est la température à laquelle tu laisses refroidir en attendant de commencer la manip.
ensuite elle va encore chuter le temps que tu agites ton tube à essai, que tu remplisses ta pipette et que tu la verses dans la boite de pétri...
et enfin que tu verses le agar agar qui devrait être à ce moment à 36°C si tout va bien :wink: . si tu veux reformuler ce passage pour une meilleure compréhesion ne te gène pas: tu m'envoies le fichier modifié en MP. comme ça quand tout le monde aura dit la sienne et qu'on sera arrivé à quelque chose de correct, je ferai un document complet avec la liste du matos, les alternatives (comme un brûleur à alcool pour fondue à la place d'un bec bunsen etc...), et il sera mis au propre à la disposition de tout le monde dans un compartiment du forum.

jodet pour la température de stérilisation en effet une cocotte va monter à seulement 112°C, mais il faut savoir que la plus part des organismes sont détruits par 10 minutes à 90°C. quelques spores pourront résister et ne seront détruites que par 15min à 121°C, mais je vais faire court: on s'en fout ! ces spores ne vivent et ne se développent pas dans un moût houblonné...qui plus est la majorité seront des moisissures qui ne pourront vivre qu'avec de l'oxygène...donc une bonne cocotte fera l'affaire...en n'oubliant pas qu'elle devra contenir tout le matos, et que les pipette sont longues...

donc soit pipettes jetables, soit grande cocotte ! j'ai trouvé chez la marque LACOR un modèle qui s'appele semi robust 25 litres qui peut contenir les pipettes. son prix est un peu cher, mais les cocottes ne sont pas données (dans les 500€ pour celle-ci).

j'utilise de l'agar agar déjà préparé dans des tubes avec bouchon à vis stérilisés, mais on peut faire le sien si on le désire et le stocker de la même manière.

pour le matériel, j'ai deux fournisseurs:
http://www.carolina.com/category/equipm ... upplies.do
http://www.revol.fr/index.asp?idgamme=5
Entre parenthèse, il m'a indiqué qu'en réutilisant à l'infini la même levure pour chaque brassin, il n'y avait que très peu de probabilité qu'il y ai une véritable "mutation" de la cellule de levure comme beaucoup le croient ! Simplement, les levures se retrouvent recouvertes de tanins et autres produits pas cool qui réduisent ainsi leur efficacité au profit d'une autre souche sauvage ou non. D'où risque d'infection !
avec un bon starter ça n'arrive pas.
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Re: synthèse du bouquin de rajotte sur la culture des levures

Message par Nezahualcoyotl »

dany06hd a écrit :je vais essayer de répondre à tout et à tous:

bélix ta solution d'agar agar devra être à la température minimum à laquelle elle reste liquide.
45°C c'est la température à laquelle tu laisses refroidir en attendant de commencer la manip.
ensuite elle va encore chuter le temps que tu agites ton tube à essai, que tu remplisses ta pipette et que tu la verses dans la boite de pétri...
et enfin que tu verses le agar agar qui devrait être à ce moment à 36°C si tout va bien :wink: . si tu veux reformuler ce passage pour une meilleure compréhesion ne te gène pas: tu m'envoies le fichier modifié en MP. comme ça quand tout le monde aura dit la sienne et qu'on sera arrivé à quelque chose de correct, je ferai un document complet avec la liste du matos, les alternatives (comme un brûleur à alcool pour fondue à la place d'un bec bunsen etc...), et il sera mis au propre à la disposition de tout le monde dans un compartiment du forum.
A toutes et tous

Je m'en fais répondre d'expérience, pardonnez moi.

Si vous désirez couler vos boites de gélose , il vous faut la maintenir en état de surfusion à un température supérieure à 55 °C . Nous procédions ainsi:
Nous versions l'agar à raison de 15 g/l dans le milieu
Nous stérilisons ce milieu par autoclave liquide ( un autocuiseur est suffisant , voire futur explication )
Nous attendions que la température du milieu baisse autour de 60 °C
Nous coulions le milieu gélosé dans nos boites ,
Nous laissions solidifier le milieu , et séchions les boites ( très important )

L'agar-agar se solidifie dés une température inférieur à 55 °C et cela se déroule rapidement rendant toute manipulation malaisée.
En alternative à un bec Bunzen, je préférais un réchaud butagaz tel que nous l'utilisions dans nos laboratoires , pas toujours raccordés au gaz. Le réchaud à alcool est un peu faible et limite la zone efficace de travail.

Cordialement

Christophe, de garde

PS: si possible, préférer le matériel jetable : boite de Pétri , pipettes stériles , ...
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dany06hd
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Re: synthèse du bouquin de rajotte sur la culture des levures

Message par dany06hd »

donc la méthode de rajotte est sujette à contreverse...
bon si je comprend bien, il vaut mieux remplir la boite de pétri, avec le agar agar chaud, laisser refroidir à l'envers pour se débarasser de la condensation dans un endroit chaud, , et innoculer après en faisant des zig-zag dans la partie superieure de la boite que l'on tient à la verticale pour éviter qu'il rentre des saletés, puis refaire des z-z après l'avoir tournée d'un 6ème de tour, ainsi de suite en faisant un tour complet. ceci afin d'avoir des concentrations différentes dans 6 secteurs différents, afin de pouvoir isoler plus facilement un échantillon correct (je décris l'autre manip pour ceux qui ne la connaissent pas).
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Re: synthèse du bouquin de rajotte sur la culture des levures

Message par Nezahualcoyotl »

dany06hd a écrit :donc la méthode de rajotte est sujette à contreverse...
bon si je comprend bien, il vaut mieux remplir la boite de pétri, avec le agar agar chaud, laisser refroidir à l'envers pour se débarasser de la condensation dans un endroit chaud, .
Le problème est que tu ne te débarrasseras pas de la condensation de la sorte . Soit les faire "sécher" sous une hotte à flux laminaire ( mais tu noteras le problème ) , soit les laisser une nuit boite ouverte renversée sur un papier absorbant.

Si tes boites demeurent trop humides , vous courrez le risque que des gouttelettes d'eau tombent , se proméenent sur la surface de la gélose et donc dispersent les colonies.

Je posterai des photos...

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dany06hd
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Re: synthèse du bouquin de rajotte sur la culture des levures

Message par dany06hd »

Vous ne pouvez pas consulter les pièces jointes insérées à ce message.
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Re: synthèse du bouquin de rajotte sur la culture des levures

Message par Chris13 »

Autre possibilité, tu fais refroidir tes boites entrouvertes autour du bec bunsen, le temps que la buée s'enlève.
miladiou
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Re: synthèse du bouquin de rajotte sur la culture des levures

Message par miladiou »

Christophe Pichon a écrit : Je posterai des photos...
Christophe , de garde
plusieurs annees sur ce forum, et on attends toujours les formations les photos et autres modes d'emploi promis par C. Pichon par contre pour donner son avis "d'expert" :lol: quand le monsieur lit le mot levure...no comment

pour revenir au sujet je trouve que dany a fait un bon boulot de synthese c'est juste pas facile d'apprendre un coup de main a partir d'une description
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Re: synthèse du bouquin de rajotte sur la culture des levures

Message par PVE »

Facile de se moquer.
Depuis avril 2006, tu as expédié 82 messages. C'est peu, mais s'ils sont de la même veine que ce dernier, tu as bigrement raison de t'abstenir.

En ce qui concerne le Monsieur que tu méprises, j'ai eu le privilège de bénéficier d'une formation très didactique de sa part, et s'il n'a guère le temps de s'occuper de poster, cela n'enlève rien à sa compétence de biologiste.
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Re: synthèse du bouquin de rajotte sur la culture des levures

Message par Nezahualcoyotl »

Chris13 a écrit :Autre possibilité, tu fais refroidir tes boites entrouvertes autour du bec bunsen, le temps que la buée s'enlève.
Le soucis est que , compte tenue de l'épaisseur de gélose coulée dans la boite , la condensation est forte. Donc longue à sécher.
Sous une hotte à flux laminaire cela me prend plus d'une heure.
Nous pourrions diminuer la quantité de gélose par boite. Plus de boite ! Mais cela est un mauvais calcul pour une conservation à moyen terme ( une année ) des boites et des colonies. La gélose séche alors même conserver à + 4°C.

Christophe , de Garde
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