Les levures ⇒ synthèse du bouquin de rajotte sur la culture des levures

[Chris13]

Bonjour,
l'idée c'est de laisser les boites ouvertes autour du bec bunsen, le couvercle retourné à côté de la boîte.
Une fois la gélification entamée, la chaleur diminue, moins de buée possible.
Tu poses ton couvercle à la moitié de la boîte, et tu ferme une fois le milieu gélifié.
Pour finir, incubation des boîtes à l'envers.

@+

[belix]

tout d'abord dany je te prie d'accepter mes excuses si tu as pu penser que mes remarques visait a dénigrer de quelque façon que ce soit le fabuleux travail de synthèse que tu mets a notre disposition, ce n était clairement pas mon intention. Je cherchais juste a valider un processus que mon ignorance totale dans le domaine de la biochimie ne me permettait pas de faire sans conseils ou remarques avises.
Quand je lis les contraintes de la méthode deux a savoir gélifier sans condensation le support avant inoculation ne me parait pas de plus simple non plus. En effet si il s'agirait de préparer une solution d'agar agar, de la stériliser par autoclave ou autocuiseur puis attendre que le mélange soit a 60° pour préparer les boites qu'il faut ensuite laisser prendre suffisamment longtemps autour d'une flamme pour attendre le moment ou le mélange sera suffisamment pris pour ne pas retomber quand on devra les retourner pour les laisser finir de sécher sans que la condensation ne retombe ... Je me dis que çà va me prendre un truc comme au moins 6h a rester bloquer devant pour préparer 10 boites de pétri gélosées et la je finis pas me demander si il ne serait pas plus rentable d'acheter directement des boites de petri déjà gélosée et stérile !!!

[yannick54]

Bonsoir a tous
petite question au specialiste en bacterio
qui a deja entendu parle de gelose profonde
chez nous au labo il s'en serve pour conserver au max les bestiole staphilo ou autres avant des les envoyer a d'autres labo pour analyse

merci
yannick

[Nezahualcoyotl]

Bonjour,
l'idée c'est de laisser les boites ouvertes autour du bec bunsen, le couvercle retourné à côté de la boîte.
Une fois la gélification entamée, la chaleur diminue, moins de buée possible.
Tu poses ton couvercle à la moitié de la boîte, et tu ferme une fois le milieu gélifié.
Pour finir, incubation des boîtes à l'envers.

@+

Oui , c'est tout à fait praticable. Mais cela présente deux inconvénients majeurs à mes yeux.
En premier lieu , tu ne peux disposer approximativement que 5 boites de la sorte autour de ton bec Bunzen .
En second, il te faut les laisser ainsi bien plus que le temps nécessaire à la gélification du milieu les boites dans la zones de convention de la flamme.

Mais , je le répète : c'est tout à fait envisageable.

Christophe , de garde

[belix]

Oui , c'est tout à fait praticable. Mais cela présente deux inconvénients majeurs à mes yeux.
En premier lieu , tu ne peux disposer approximativement que 5 boites de la sorte autour de ton bec Bunzen .
En second, il te faut les laisser ainsi bien plus que le temps nécessaire à la gélification du milieu les boites dans la zones de convention de la flamme.

Mais , je le répète : c'est tout à fait envisageable.

Christophe , de garde

Mais l'autre alternative ca peut etre quoi car une hotte laminaire on a pas ca la maison, ou bien je prends la hotte de la cuisine, ca m etonnerait?

[Nezahualcoyotl]

Mais l'autre alternative ca peut etre quoi car une hotte laminaire on a pas ca la maison, ou bien je prends la hotte de la cuisine, ca m etonnerait?

Comment cela , vous n'êtes donc pas équipés???

Une autre possibilité que j'ai pratiqué : nous séchions nos boites , une nuit , en les retournant , ouverte donc sur du papier absorbant. Quand tu as préparé une quarantaine de boite même une hôte peut se révéler trop petite.
J'ai vu aussi , mais jamais appliqué , un collègue qui ne séchait pas ses boites à l'issu de leur préparation. Lors de leur utilisation, il ouvrait sa boite, secouait violemment le couvercle pour en chasser les gouttelettes d'eau et passait son couvercle et sa boite dans le cône de travail de la flamme.

Il est préférable de préparer un grand nombre de boite . Avec 500 ml de milieu , vous coulerez entre 15 et 20 boites. Conservez les à +4° ainsi plusieurs mois. Idéalement en les scellant avec un Parafilm ou à défaut un sparadrap .
Et non Bélix , la manip n'est nullement compliquée. Je l'ai même apprise. La seule différence c'est que je l'ai acquise en m'excençant , en manipulant avant d'autres , en TP puis en labo. Il est aléatoire de l'acquérir par la simple lecture, je trouve quand les bases ne sont assurées.
C'est bien pourquoi , je salue l'excercice de Dany , chapeau bas!!


Christophe, encore de garde

[Chris13]

Bonjour,

pour répondre à Yannick54,

Les petits tubes dont tu parles sont effectivement fait pour conserver une souche isolée.

En usage courant je pense pas que ce soit le top, car si je me souviens bien (petit flashback 10 ans en arrière ) pour récupérer la colonie, il faut découper le tube.

Si le but est de faire une banque de levures c'est peut être le support à utiliser

@+

[dany06hd]

bélix t'inquiète pas je n'ai rien mal pris. en effet tout ce qui peut te simplifier la vie, comme des boites de pétri déjà prètes c'est bien sûr OK !
les manips, il faut pas trop bloquer dessus, quand tu as le matos tu commences en anticipant au maxi, et puis tu vois... si ça va pas et bien, tu recommences en essayant de tirer parti de tes erreurs... mais tu dois déjà savoir tout ça ... on n'a rien sans rien, et je pense que ça vaut le coup d' essayer.

[Nezahualcoyotl]

Bonsoir a tous
petite question au specialiste en bacterio
qui a deja entendu parle de gelose profonde
chez nous au labo il s'en serve pour conserver au max les bestiole staphilo ou autres avant des les envoyer a d'autres labo pour analyse

merci
yannick

Bonjour,

L'inconvénient avec la gélose profonde , comme tu la nommes, c'est , à mon avis le prélèvent des colonies. Elles seront incluses dans la gélose et difficiles à dissocier.
Dans la méthode que décrivait Dany en premier lieu , dans laquelle il s'agissait de couler ses boites avec les levures j'y décèle le même inconvénient. Mais de plus , quand le but est d'isoler des colonies , cette méthode présuppose que nous possédions, même approximativement, une idée de la concentration en levure, ou de procéder à plusieurs étalement afin qu'au moins l'une des boites coulées présente des colonies bien dissociées.

Cependant, comme le suggérer Chris 13, cette méthode peut être intéressante pour stocker des souches en vue de leur utilisation future. Attention toute fois, je ne garantie rein au delà de 24 mois .



Christophe , de garde

[Nezahualcoyotl]

Voici donc quelques photos d'étalement de souche en procédant par stries en zigzag :


et







Une fois isolée, je procède souvent à un repiquage de mes souches afin de les conserver sous la mains pour des précultures .






et






Voilà

Christophe, entre biberons et couches culottes!