Les levures ⇒ Point sur la culture sur gelose

[Fifou]

Hello,

Je me permets de m'incruster dans ce topic, si le modérateur juge que ce n'est pas opportun qu'il me déplace !
Je développe un projet perso de culture de levures DIY, c.a.d avec tout ce qu'on peut avoir chez soi faire des la culture de levures et à terme remplir les objectifs suivants :
- Isoler et conserver des levures issues de vos brassins ou d'autres bières
- Dénombrer précisement des levures
- Détecter une contamination

Pour la première étape voici un petit tutoriel sur la fabrication d'une gélose maison à l'extrait de malt, que j'ai testé chez moi cette semaine, j'uploaderai les photos dès que possible.

Matériel / Ingrédient :
- Bière dont on veut isoler la levure
- Malt
- Eau
- Agar-Agar (trouvable dans votre supermaché, au rayon cuisine avec la gélatine)
- Coton-tige
- Feuille d'Aluminium
- Pot de confiture vide avec couvercle
- Une marmite
- Réchaud de camping (qui fera office de Bec Bunsen)

Mode d'emploi :

1. Préparation d'outils stériles

Prenez les coton-tiges et entourez-en le coton d'un bout de feuille d'aluminium bien serré, préparez en une dizaine et mettez les dans un plat qui passe au four
Passez-les au four 1 heure à 150°C, avec les bocaux de confiture (histoire de les stérilisez une première fois). Vous pouvez coupler ça avec la fabrication d'un gateau, tant que les conton tige ne fondent pas. Le bout d'aluminium permet une fois sorti du four de garder le coton stérile.

2. Préparation de la gélose

Si vous faites de la bière, prélevez du moût juste avant houblonnage, environ un Galopin (vous pouvez congeler ce volume si vous reportez votre fabrication de gélose à plus tard). Sinon faites juste un demi litre de moût dans une casserole, de la manière la plus simple possible (Ratio d'empatage de 3, monopalier à 68°C). Mélangez le galopin de moût à 2g d'Agar (au final la concentration d'agar doit être d'environ 15g/litre). Faites attention à bien délayer la poudre dans le liquide, sinon l'Agar va former un gros grumeau difficile à faire fondre ensuite. Faites bouillir le tout environ 10 minutes et versez-le dans des pots à confiture jusqu'à 1/3. Poser le couvercle des pots sans les serrer hermétiquement et placez-les dans une marmite avec un fond de 5cm d'eau. Faites bouillir le tout une heure. Une fois bouilli sortez les pots et sans fermer hermétiquement le couvercle, posez les de manière inclinée à 45°C (la gélose doit affleurer le bord). Cette inclinaison dit permettre d'augmenter la surface disponible, et de laisser l'eau s'écouler au font de la gélose une fois droite. Une fois froids fermer le couvercle et réservez vos gélose à plat au frigo.

3. Etalement

Buvez la bière que vous souhaitez isoler et conserver en le fond. Allumer le réchaud sur un plan de travail propre, laisser le allumer 5 min, sortez une de vos gélose et lavez vous les mains. En restant dans un rayon de 15cm de la flamme ( le fameux "cône de stérilité") ouvrez le couvercle de la gélose, enlevez le bout d'aluminium d'un coton tige et rempez le dans la bière. Etalez le ensuite sur la gélose en partant du fond vers le bord en faisant de zig-zag, comme un skieur qui descendrait du fonc de la gélose vers le bord. Fermez le pot et incubez tout ça 3 jours à température ambiante (à plat)

Résultat :

Vous devriez obtenir une masse informe de colonies de levures au fond du bocal et quand vous vous rapprochez du bord voir des colonies de levures isolées. Ce sont des UFC (unités formant colonies) = une levure unique qui a poussé sur place et donné quelques millions de levures, qui forment un amas (une colonie). Vous pouvez repartir d'une de ces colonies à l'aide d'un coton tige stérile pour ensemencer une culture starter quelque jours avant votre brassin. Je ferai peut être un tuto sur ce dernier point si il y a des intéressés !

Les photos dans le message suivant.

Si vous avez des questions, ou des suggestions sur des applications que vous souhaiteriez que je teste, n'hésitez pas !

[Fifou]

Les outils avant stérilisation au four :



Les gélose en pleine stérilisation :



Les géloses qui refroidissent :



Le matos, prêt à étaler :



Le résultat ;




Vous remarquez que le résultat ici n'est pas terrible, je n'ai pas de belles colonies isolées. Ceci est dû au fait que j'ai étalé un fond de bouteille avec vraisemblablement trop de levures. Il faudrait que je les dilue dans de l'eau ou que je prenne la bière sans le fond. Mes géloses aussi sont trop humides, du fait de la stérilisation vapeur. Je vais essayer une autre méthode pour améliorer ce point.

A priori on devrait pouvoir différencier certaines bactéries des levures rien qu'à leur aspect, mais pas toutes. Pour vraiment diagnostiquer un brassin je compte faire une gélose avec un antibiotique ou jouer sur les températures. A suivre !

[bazoo]

Vu la hauteur de tes bocaux, tu ne pourras jamais faire d'isolation . Prends toi des boites de pétri, ca reste incontournable.
Tu peux aussi faire en tube sur gélose inclinée, mais c'est un poil plus dur.
De la même façon, les cotons tiges ne sont pas , AMHA, adaptés, une pipette pasteur ou une ose sont plus adaptés. Pour le tungstene tu peux essayer te trouver un vieux chauffage électrique des année 50
Avec un coton tige, tu prends beaucoup trop de camelote

Pourquoi empâtes tu le moût à 68 et pas lus bas pour avoir un max de sucres fermentescibles?

[Nanarf]

En plus la stérilisation au four c'est limite

Les temps de stérilisation recommandés par la Pharmacopée Européenne,pour la stérilisation par l'air chaud sont au minimum de
4 heures à 140 °C
2 heures 30 minutes à 160 °C
1 heure à 170 °C
30 minutes à 180 °C,

Alors que 15 minutes à la cocotte minute c'est parfait

[picobrasseur]

Bonjour,

Il me semble que c'est l'étaleur qui pose le plus gros problème.

Avec une öse ça devrait être plus correct pour isoler les colonies.

Pour le reste ça me paraît jouable ?

Bon courage

[bazoo]

Avec une öse et des pots de confiture, ca va faire du labour profond comme y disent à la FNSEA

[Fifou]

Hello,

Merci pour vos conseils !

Je sais bien que c'est mieux avec des boites de Petri, une oese et un autoclave (je bosse dans un labo!) mais l'idée ici c'est de le faire sans aucun matos disponible, pour ceux qui voudraient s'y essayer sans avoir à passer une commande...Du coup vu vos remarques il serait peut etre plus simple de juste montrer comment bricoler une oese soit même (et ainsi zapper le passage au four) ?

Si vous avez un cocotte minute c'est effectivement mieux pour les stérilisations !

[bazoo]

L'öse, je l'utilisai plus pour prélever les colonies et les mettre en milieu liquide.
En isolement, j'ai toujours préféré la pipette pasteur et la technique des cadrants.
Je n'ai jamais utilisé le râteau par contre

[Nezahualcoyotl]

L'öse, je l'utilisai plus pour prélever les colonies et les mettre en milieu liquide.
En isolement, j'ai toujours préféré la pipette pasteur et la technique des cadrants.
Je n'ai jamais utilisé le râteau par contre

Les öses sont maintenant calibrées pour des volumes de prélèvements , 1 ou 2 µl , ce qui permet de prendre un volume connu afin de procéder à l'étalement. Et il faut caresser le gélose, Bazoo, pas la laborer!!
A noter que je prélève encore souvent mes colonies à l'aide de cure dents en bois que j'ai autoclavé: facile et peu cher!

Le râteau sert à étaler de manière régulière une population sur la gélose afin d'obtenir un tapis de cellule, sur un milieu sélectif par exemple.

Nezahualcoyotl,

[Fifou]

Oui, et le rateau permet aussi d'étaler des volumes plus important, comme 100ul, notamment pour les dénombrements.

Du coup je vais sûrement faire une version2 du tutoriel avec cocotte minute et oese fabriquée maison. Je garde les pots de confiture pour que ça soit du «fait maison». Pour la température d'empatage vous conseillez quoi du coup ?