Les levures ⇒ isoler une souche de levures d'une bouteille

[Nezahualcoyotl]

J'ai une question (sans doute idiote) au sujet de la conservation des levures.
Là j'en ai isolé 2 souches (façon Mbrew pour tester) sur du mout/agar que j'ai fait, tout va très bien, elles ont commencées à ce multiplier au bout de 6/8h (à l'oeil) et j'ai mis les petits bocaux au frigo... Mais elles continuent a "pousser" grave... En 15 jours (à 4°C) elle auront remplis le fond des bocaux.
J'ai ouvert (et jeté après) un bocal aujourd'hui, juste pour sentir, parfait, ça sent bien la levure (et c'est bien blanc, mais pas blanc nacré comme avec certain mycélium que j'ai eu cultivé).
Ma question est la suivante, si j'avais gardé le tube à essais avec les levures (et la bière) au frais, j'aurais pu les réanimer après une année (par exemple) ?

Une pousse aussi rapide et continue à +4°C est quelque peu suspecte. J'ai encore des boites d'Agar avec colonies , d'aôut 2008, des replicats et les clones ont pas envahi la boîte.

Quel taille , tes bocaux? Quelle température d'incubation pour les cultures en Agar?

Nezahualcoyotl, loin, très loin

[Mr-Phil]

J'ai laissé incuber à T° ambiante (23°C environ) durant 24h
Les 2 à gauche sont les même et celle de droite une différente (mais sa couleur ne me plais pas)

[Nezahualcoyotl]

J'ai laissé incuber à T° ambiante (23°C environ) durant 24h
Les 2 à gauche sont les même et celle de droite une différente (mais sa couleur ne me plais pas)

trop rapide! bactéries???

Nezahualcoyotl, toujours loin

[Northern]

Après 4 jours on a enfin pu observer un bon développement de colonies sur les pétri que j'ai utiliser pour la levure White Labs Abbey Ale. Pour la Chimay Blanche, toujours rien. Les pétri sont présentement conservés au réfrigérateur et aujourd'hui je vais récupérer 2 colonies et les mettre dans 2 tubes différents contenant 2-3ml d'eau distillé passé au stérilisateur. Un tube sera conserver a température ambiante l'autre au réfrigérateur pour évaluer la durée de vie selon les condition de conservation.

Quelques photos des colonies :




Alex

[Northern]

Bon c'est fait. Cependant, les colonies sur les pétris étant très petites, j'ai peur d'avoir transféré une trop petite quantité de levures dans mon 3ml d'eau stérile. Dans les documents que j'ai lu, il était souvent écrit qu'il fallait une très petite quantité de levure mais qu'elle devait être suffisante pour troubler l'eau. Moi je n'ai pas vraiment l'impression que mon eau est trouble, peut être très très légèrement. Bref dans quelque jours je remettrai sur agar pour voir s'il y avait bel et bien assez de levure dans l'eau.

Le résultat :


Avouez que vous êtes jaloux de mon raque a échantillon professionnel !


Alex

[brasseriemontoise]

Au risque d'être rabat-joie L'idéale aurais été de compter les cellules en suspension pour ensuite en fin d'expérience ou à intervale régulier de les re-compter avec un colorant (bleu tripan ?) montrant les cellules morte. Cela aurais montré une courbe de dégradation des levures... Mais bon, là je chipote mais l'idée est a explorer (si cela n'existe pas déjà dans un bouquin quelconque )

JP

[Northern]

En effet, ça aurait été l'idéal mais malheureusement, je n'ai pas de microscope...

Alex

[belix]

En tout cas super cool comme reportage !!! ca risque d'en décoincer plus d'un car c'est vrai que cela parait pas des plus facile a faire a prime abord ... alors te voir te lancer et avoir des mise a jour photos ca permettra a beaucoup de ceux qui osent pas se lancer d'avoir au moins une base de référence.

Merci Alex et au plaisir de lire la suite

[Nezahualcoyotl]

Bon c'est fait. Cependant, les colonies sur les pétris étant très petites, j'ai peur d'avoir transféré une trop petite quantité de levures dans mon 3ml d'eau stérile. Dans les documents que j'ai lu, il était souvent écrit qu'il fallait une très petite quantité de levure mais qu'elle devait être suffisante pour troubler l'eau. Moi je n'ai pas vraiment l'impression que mon eau est trouble, peut être très très légèrement. Bref dans quelque jours je remettrai sur agar pour voir s'il y avait bel et bien assez de levure dans l'eau.


Alex

Alex,

Dans quels documents as tu lu cela??
A l'aide de quoi as tu transféré tes colonies dans ton tube d'eau stérile ?

Je sais que pour ma part , la colonie prélevée est à peine plus gros qu'une tête d'épingle. Donc le trouble , car il est nécessaire de bien secouer afin de disperser les levures ( qui ont une très forte tendance à demeurer agrégées après leur culture sur Agar ) , est peu discernable.

Nezauhalcoyotl , levurophage

[Northern]

Merci pour les commentaires Bélix
J'aurais bien aimer faire un petit reportage photo du processus mais c'est déjà assez difficile de manipuler les instruments, tubes, pétri en restant dans la zone "stérile" sous le bruleur, manipuler une caméra aurait été impossible. Pour les manipulations, qui peuvent sembler difficile mais qui ne le sont pas réellement si on fait attention, il y a le lien que j'ai poster un peu plus haut. Le mec qui a fait le site à créé quelques animations pour ceux qui sont plus visuels.

Alex