Non pas du tout. Mon approche n'est pas bonne du tout à ce niveau.Jinac a écrit :Est-ce que t'as attendu avec ta solution de bleau avant de rediluer ?
Généralement on dilue à la toute fin avec le bleu (rapport 1/1) et on attends plusieurs minutes pour laisser le temps de pénétrer...
J'ai mis 1mL de levure, tout de suite derrière 0,5mL de bleu de méthylène et 9.5mL de solution isotonique.
Le bleu de méthylène a été préparé à partir d'une poudre. Dosage 1g pour 1L. J'ai préparé une bouteille de 500mL que j'ai mis de côté. Je ne pense pas que ca perde ces propriétés avec le temps. A confirmer ...
Par contre, une chose est certaine je suis très loin du rapport 1/1
Oui c'est ce que j'ai fait et je peux te dire que pour la photo d'hier, j'ai attendu très longtemps puisque c'est un tube à essai que j'avais préparé dimanche soir. Donc plus de 24H d'actions ...Cede a écrit :Pas mieux que Jinac !
Tu dilues tes levures et ensuite tu balances la coloration, tu attends quelques minutes et tu comptes.
Il ne faut pas attendre une heure non plus, car au bout d'un long moment elles ont tendance à absorber le bleu.
Je pense que le bleu est trop dilué, et donc que la concentration soit trop faible pour pouvoir être absorbée.
J'en avais tiré la même conclusion hier. Je vais sacrifier un sachet de levure sèche pour assurer une observation.Hush a écrit :Bonjour,
Pour ce que l'on peut distinguer sur ta photo, on dirait que tes levures ont formé des ascospres. Il faudrait les observer sur une lamelle à plus fort grossissement en cherchant à améliorer la qualité.
Peut être serait il préférable de commencer en observant une "levure neuve" . Tu réhydrates une pincée de levure et tu observes sur une lame classique, pas la cellule de comptage. Avec la cellule j'ai toujours un contraste moins bon et parfois des artefacts. Tu cherches le meilleur réglage. Tu colores et tu observes . Tu "génocides" la moitié de ta préparation en chauffant au micro onde comme tu as déjà fait, tu colores et tu observes toujours sur une lame classique.
Evidemment, tu viens nous faire un compte rendu.
Bon TP !
Hush
Je vais juste appliquer un protocole plus strict avec toutes les informations fournies. Je vais extraire dans un tube à essai 1mL de levure, y ajouter 4mL de solution isotonique et enfin ajouter 5mL de bleu de méthylène.
J'ai remarqué que la qualité d'observations avec une cellule de comptage et bien moins qualitative qu'une observation sur une lame classique.
Je vais répéter ces opérations et je reviens vers vous après mon TP !!
Concernant mon observation d'hier, les ascospres sont possiblement responsables de mes constatations de plusieurs "noyaux". Si j'ai bien compris (merci Wikipédia) c'est une division cellulaire foireuse qui engendre des cellules défaillantes. Elles ne sont plus identiques à la mère mais a perdu une bonne partie de ces chromosomes Quand je disais qu'elles étaient en mode super héros ... j'étais pas loin !!
Merci encore à tous et bonne journée !!