Les levuresComptage des levures

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Nezahualcoyotl
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Re: Comptage des levures

Message par Nezahualcoyotl »

Cede a écrit :Ca j'ai :)
Quel modéle?

Et le reste? pipette? tubes? Bleu Trypan 2% ?

Nezahualcoyotl, tout compris
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NeverWhere
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Cede
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Re: Comptage des levures

Message par Cede »

Oh là tu m'en demande beaucoup ;)
Il faudrait que j'aille le chercher dans le garage.

le reste pipettes and co, je sais ou les trouver, il y a un distributeur a Quebec qui a tout ce qu'il faut pas trop cher.
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Re: Comptage des levures

Message par Nad91 »

Avant de passer à la phase pratique du comptage de levures, je rassemble un maximum d'information sur le sujet. :dance:

Il me reste plus q'un dernier détail à régler, l'étape final... j'ai nommé, la formule pour déterminer la concertation cellulaire et ceux quelque soit la lame de comptage utilisée (Malassez, Neubauer, Thoma...). En me baladant sur la toile, je suis tombé sur cette formule :

Concentration cellulaire = nombre de cellules x facteur de dilution x facteur de conversion / nombre de carrés x volume d‘un carré

Voici un exemple d'utilisation fournit par le site avec l'utilisation du lame de Neubauer pour le comptage de leucocytes.

Cellules comptées par carré : 28 ; 25 ; 27 ; 26 = 106 Cellules.

Nombre total de cellules comptées : 106
Nombre de carrés comptés : 4 grands
Volume d‘un carré : 0,1 μl
Facteur de dilution : 1/20
Facteur de conversion μl en l : 1 ml =1 x103 μl

Concentration cellulaire (cel/ml) = 106 x 20 x 103/4 x 0,1

Concentration cellulaire = 106 x 50 x 103

Concentration cellulaire = 5 300 000 cel/ml


Que pensez-vous de cette formule ? Elle me semble plutôt correct et facilement applicable au comptage de levure. Sinon quelle technique de calcul utilisez-vous ?

Et pour finir la question bonus ! Pour le coup c'est plus de la curiosité. Que se soit fait d'une manière ou d'une autre ça ne change pas vraiment le résultat (enfin je pense). Lors du comptage pour les cellules à cheval sur les lignes, vous applique quelle règle. Vous excluez les cellules touchant la ligne inférieure et la ligne de gauche ou celles qui touchent la ligne inférieure et la ligne de droite... :rolleyes: j'ai vu tout style de possibilité sur les différents site et je me demandez si une de ces logiques prédominé dans le milieu brassicole.
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Re: Comptage des levures

Message par Nezahualcoyotl »

Nad91 a écrit :
Que pensez-vous de cette formule ? Elle me semble plutôt correct et facilement applicable au comptage de levure. Sinon quelle technique de calcul utilisez-vous ?

Et pour finir la question bonus ! Pour le coup c'est plus de la curiosité. Que se soit fait d'une manière ou d'une autre ça ne change pas vraiment le résultat (enfin je pense). Lors du comptage pour les cellules à cheval sur les lignes, vous applique quelle règle. Vous excluez les cellules touchant la ligne inférieure et la ligne de gauche ou celles qui touchent la ligne inférieure et la ligne de droite... :rolleyes: j'ai vu tout style de possibilité sur les différents site et je me demandez si une de ces logiques prédominé dans le milieu brassicole.
Tout à fait correct!

Juste dans ton calcul posé , pense aux parenthèses!

Pour les lignes de délimitation, tu en choisis deux que tu exclues de ton comptage par convention ( c'est personnel, juste s'assurer que la somme de leurs longueurs soient égales à celles que tu comptes ) .

Bon comptage!

Nezahualcoyotl
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Re: Comptage des levures

Message par Cede »

Le maitre a parlé
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Re: Comptage des levures

Message par Nad91 »

Promis je serai un bon élève :D

Merci pour la confirmation, je vais enfin pourvoir m’amuser avec mon microscope (bien entendu dans le plus grand respect de nos amis les levures).
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Cede
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Re: Comptage des levures

Message par Cede »

Je déterre, mais entre 2012 et aujourd'hui il y a eu pas mal d'évènements qui m'avaient séparé du brassage, surtout une séparation dans laquelle j'ai perdu pas mal de choses :lol:

J'ai fini par racheter les cellules de comptage chinoises... et des couvre lames car ça ne venait pas avec, et j'ai récupéré à pas cher, 99$, un autre microscope de marque SWIFT modèle M1000D.
Ce n'est pas jeune, mais en bon état, binoculaire, 3 objectifs grossissements de 250,400 et 1000.
Mieux que ce que j'avais avant finalement.

Donc j'ai sortit un échantillon d'un pack de 2011 de Wyeast que je me suis amusé à claquer pendant les vacances et j'ai fait un petit starter de 500ml avec 1/4 du paquet en suivant.
J'avais remplis des tubes de 50ml avec le slurry récupéré et dilué à approx 50% avec une solution isotonique pour conserver au frais.
Il me restait un tube avec 15 ml, donc je me suis servi de lui pour compter.

J'ai commencé par diluer à 1+9 avec de l'eau déminéralisée et j'ai refait une autre dilution à 1+9.

Passage dans la cellule et comptage, ça me donne approx 1.7M par ml sur 5 cellules.
J'ai fouillé dans mes réserves pour du bleu de méthylène et j'ai fait un autre comptage après dilution à 1+1 pour voir combien j'avais de cellules viables.
C'est quand même un bon 92% !

Je vais emprunter la cam usb du microscope au boulot qui prends la poussière, voir si j'arrive à la monter à la place d'un objectif pour faire des photos :)

Prochaine étape, la reprise de la banque congelée qui elle aussi a disparue... :shock:
Tant mieux, car les tubes de 15ml en boro n'étaient finalement pas la meilleure solution.
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Re: Comptage des levures

Message par Penn-Maen »

@Cede : si je comprend bien, tu avais un tube de slurry dilué à 50% avec une solution isotonique et 7 ans après, tu as encore 92% de viabilité ? :shock:
Aucun lavage ? Tu aurais une idée des conditions de conservations de ton tube (température, lumière, etc...)

Edit : ou c'est un pack de 2011 que tu as claqué récemment et tu as fait le comptage sur le résultat du starter ? (désolé, je comprends très vite si on m'explique très longtemps :mrgreen: )
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Re: Comptage des levures

Message par Nezahualcoyotl »

Cede a écrit : J'ai commencé par diluer à 1+9 avec de l'eau déminéralisée et j'ai refait une autre dilution à 1+9.


J'ai fouillé dans mes réserves pour du bleu de méthylène
Belle expérience.

Mais faire tes dilutions dans un autre milieu que de l'eau déminéralisée ( une solution isotonique, par exemple ); attention à la conservation du bleu de méthylène ( cela pourrait d'amener à une surestimation de ta viabilité ) .

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Re: Comptage des levures

Message par Cede »

Penn-Maen a écrit :ou c'est un pack de 2011 que tu as claqué récemment et tu as fait le comptage sur le résultat du starter ?
C'est un starter de 500ml sur 1/4 du paquet.

La prochaine fois je ferais un comptage sur le paquet, je pense qu'il m'en reste un de 2012.
Nezahualcoyotl a écrit :Mais faire tes dilutions dans un autre milieu que de l'eau déminéralisée ( une solution isotonique, par exemple ); attention à la conservation du bleu de méthylène ( cela pourrait d'amener à une surestimation de ta viabilité ) .
Ok, je n'en avais pas sous la main.
Pour le bleu, oui, je me souviens. Je l'ai préparé juste avant vu que je l'ai sous forme de poudre. Mais je vais acheter du bleu de trypan comme tu conseillais.
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