coucou, je me permets de répondre avec ce que j'ai appris en labo
Déjà je tiens à dire que j'ai JAMAIS fais de stock avec des levures à bière (on bosse plus avec des procaryotes parfois avec p.pastoris) mais normalement la méthode de travail reste la même, t'as juste moins peur de te prendre des spores de levures dans le nez que de certaines bactéries ^^.
Pour tout ce qui est pipettes en verre (les bonnes vielles pasteurs en verre par exemple), comme pas mal de gens l'ont expliqué un passage à la flamme va la stériliser c'est genre safe. Le soucis que tu peux avoir c'est (et avec les premières manip ça va t'arriver) de mettre ta pipette trop vite en contact avec ton milieu et tuer des levures en les brûlant (c'est du vécu mais avec des boucles d'inoculation ^^) et aussi le fait que tu galères à pipetter des volumes précis avec une pasteur. En labo on a plus tendance à utiliser des micropipettes pour pipettes des cellules et des milieu ça a l'avantage d'être plus précis. Si je dois pipettes des solutions plus dense comme du glycérol par exemple, je prendrais une pipettes à déplacement positif (pour être précis mais c'est cher), ou une seringue sans aiguille (mais tu seras pas stérile et ça sera pas forcément un problème mais j'y reviens plus tard) ou une pasteur en verre justement (j'ai jamais essayé pour le coup pas sûr que ça passe bien bien, faudrait demander à un chimiste ^^).
Les micropipettes c'est justement les pipettes à tips (pointes) en plastiques comme celles de Aliexpress, comme je disais plus tôt on utilise que ça en labo (mais pas les version aliexpress). Tu peux prendre chez eux, perso j'ai pris une pipette 100-1000 microL y a pas mal de temps, elle s'utilise comme une autre. Par contre elles sont pas calibrable et j'ai pas de micro balance chez moi pour vérifier la calibration (avec le confinement je me vois pas arriver en labo pour tester une pipette ^^), donc par pas du principe qu'elle aura 0 erreur, mais pour la culture de levures maison ça fera clairement le café. Evidemment faudra stériliser tes tips (tu peux ne pas le faire et partir du principe que dans un milieu tes levures vont mieux se développer que tout le reste,... mais c'est pas le cas, les bactéries poussent toujours plus vite ^^). On a tendance à autoclaver et à stériliser nos tips à la "dry heat" (chaleur sèche) pour éviter des problèmes de condensations que t'aurais avec la cocotte minutes. Si t'as pas d'autoclave, je saurais pas trop, j'ai lu des articles qui tendait de faire des désinfection à l'UV et qui proposaient ça pour du matos de chirurgie mais les résultats était pas si ouf et c'est ultra dépendant du support, des souches, du temps d'exposition etc... Si tu veux je peux sans soucis demander à mon professeur de bioprocédé comment lui ferait sans autoclave. En soit on préfère utiliser des cocottes minutes et stériliser à la vapeur des milieu liquides (ou la condensation n'est pas un problème justement). Je crois que pour les pipettes j'ai dis tout ce qui me venait d'important ^^. Ah! je diras qu'avec une pipette de 100-1000 et une de 10-100 tu devrais pouvoir faire tout ce qu'il te faut (de mémoire).
Pour les glycerol stocks, nous ce qu'on fait c'est des stocks dans des cryotubes de 2 mL. Je te mets un rapide résumé du protocole qu'on utilise si ça peut aider. D'abord on prépare du glycérol 80% (w/w) en dilluant avec de l'eau déminéralisé, on met 750 microlitre par cryotube, on autoclave et on conserve à température ambiante. Après on bosse avec les milieux de culture nous.... Comme tu l'as dit, la pression osmotique est importante, pour résumer dans un milieu hypertoniques (avec trop de sels), tes cellules vont libérer de l'eau pour rééquilibrer les concentrations entre les deux cotés de leur membranes. Si la solution est trop concentré en sel, la cellule va totalement se vider, n'aura plus d'eau, péter et mourir. De la même façon dans une solution hypotonique (avec pas ou trop peu de sel), les cellules vont se gorger d'eau, pour diluer leur sels, elles vont se gonfler, exploser et mourir. Donc ouais l'équilibre osmotique est pas mal important ^^. Le problème de l'eau dém c'est qu'elle est pas ultra chargé en sel.. j'ai jamais tenté, ça me semble pas optimal mais le mieux c'est d'essayer et de comparer avec d'autres méthode. Bon pour en revenir au stocks, dans nos cryotubes, on ajoute 750 microL de milieu inoculer la veille avec les cellules d'intérêt. (Si t'as besoin d'aide pour faire des cultures en erlenmeyer hésite pas ^^) Et enfin on mélange en retournant les tubes doucement (faut surtout pas vortex, ou secouer trop, fort c'est quand même des gentilles cellules vivantes qui sont dans ton tube
). On laisse incuber à température ambiante une heure ou deux et enfin on conserve à -70°C. Pour le coup si le process est bien fait on garde nos culture jusqu'à 10 ans (pour des bactéries). (Si tu veux des références, qui parlent de cryo, je me ferais un plaisir de chercher ce que j'ai
)
Enfin pour conserver tes levures à température ambiante dans l'eau, je le ferais juste pas. Même si ça tient, c'est plus parce que tes levures vont ralentir le métabolisme à cause des conditions de merdes que tu leur donne, alors que tu pourrais les mettre dans des milieux cools et gentils pour elle
. D'ailleurs si ton moût contient que tes levures d'intérêt et rien d'autre niveau vivant, t'évites de mettre des facteurs sélectifs dur pour tes levures et tu minimise un peu les risques de mutations..
Encore un point pour tout ce qui est bosser avec des microorganismes, bosse avec un bec bunsen. En fait ta flamme, va créer une "cloche" d'air stérile autour d'elle ou tu pourras travaille en bonne condition. Met pas surtout pas de gant et désinfecte toi les mains à l'éthanol (c'est pour éviter d'avoir des gants brûlés qui te fondent sur les mains). Tout ce qui est métallique (comme boucle d'inoculation) ou verre en borosilicate (comme les pipettes pasteur, ou les lames de microscopes (pour certaines techniques) ) ça tient la flamme et tu peux les stériliser à la flamme.
Ah oui! pour les plaques de pétrie, on les enrobe dans de la parfilm, justement pour éviter les échange avec l'air extérieur. Je crois que ça se fait justement en culture amateur avec du cellophane (j'ai pas tester faut voir avec des gens qui ont fait les 2). En enfin tu peux prendre du sterile indicator tape pour tout ce que tu stérilise (genre des tips de pipette ou des milieux de culture) pour t'assurer que t'as stériliser assez de temps, je crois qu'il en ont sur aliexpress.
Je crois que j'ai répondu plus ou moins à tout. j'espère que ça aide et que c'est pas trop indigeste ^^. Si tu veux un livre qui parle du sujet je peux conseiller le fameux Yeast de Chris White, je l'ai eu en main que 30 minutes, et je l'ai vite feuilleté mais il avait l'air assez bien et assez juste niveau microbio